Gramovo barvení
Jedno ze základních barvení v mikrobiologii. Gramovo barvení dalo základ rozdělení bakterií na Gram pozitivní (G+) a Gram negativní (G-). Toto dělení je založeno na různé stavbě bakteriální stěny.
Obsah |
upravit Postup
Zkoumaný vzorek nebo kulturu bakterií naneseme na podložní sklo a postupně nanášíme barvící roztoky. Každý roztok necháme působit 20–30s. Postup si snadno zapamatujeme podle zkratky VLAS (VLAK):
- krystalová Violeť
- Lugolův roztok
- Alkohol
- opláchnutí vodou
- Safranin nebo Karbolfuchsin
upravit Pozitivita a negativita
upravit G +
Grampozitivní bakterie mají stěnu tvořenou proteoglykanem a polysacharidy, kterými prochází kyselina teichoová. Při barvení se krystalová violeť dostává do buněk a tvoří s Luglovým roztokem modrou komplexní barvu. Alkohol není schopný prostoupit buněčnou stěnou a rozpustit komplex. Dobarvení safraninem dodá bakteriím tmavě fialovou barvu.
- G + koky: Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus;
- G + bacily: Corynebacterium, Clostridium, Listeria, Bacillus.
upravit G –
Gramnegativní bakterie mají stěnu tvořenou tenkou vrstvou proteoglykanu a vrstvou lipopolysacharidu. Při stejném postupu dochází ve třetím kroku k vyplavení komplexu alkoholem a k odbarvení. Safranin dobarví bakterie červeně.
- G – koky: Neisseria;
- G – kokobacily: Haemophilus influenzae, Bordetella pertussis, Legionella, Brucella, atd.
- G – bacily: Klebsiella, E. coli, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Vibrio, Pseudomonas, Proteus, Helicobacter pylori, Yersinia, Campylobacter, Salmonella, Bacillus fragilis, atd.
upravit G labilní a nebarvící se
Některé bakterie, zvláště po dlouhé kultivaci a několikanásobném pasážování nebo pokud přežijí útok antibiotik proti buněčné stěně (L-formy), se změnit z G+ na G–.
Bakterie, které obsahují ve své stěně hodně mastných kyselin a vosků (Mycobacterium tuberculosis), se nemusí barvit podle Grama vůbec.
upravit Odkazy
upravit Související články
upravit Zdroj
RYŠKOVÁ, Olga, et al. Návody k praktickým cvičením z lékařské mikrobiologie. 1. vydání. Praha : Karolinum, 1997. ISBN 80-7184-307-5.
