Mapování genomu
Z WikiSkript
Hodnoceno 8x, počet editací 11, počet autorů 7
Děkujeme za Vaše hodnocení (3★)
Označení pro tvorbu genových map, které lokalizují jednotlivé DNA fragmenty na jejich chromozomy. K vytvoření docházelo postupně s rozvojem sekvenování DNA. K získávání jednotlivých fragmentů DNA jsou široce používány resktrikční endonukleázy.
Lidský genom obsahuje kolem 3 miliard párů bazí, které vytváří odhadem na 25 000 genů. Na počátku 90. let vznikl projekt zabývající se zdokumentováním celého lidského genomu – HUGO (Humane Genome Mapping Organization). Plná identifikace lidského genomu byla oznámena v roce 2003.
Obsah |
upravit Mapování chromozomu pomocí somatických buněčných hybridů
- Savčí buňky různého druhového původu mohou při společné kultivaci in vitro náhodně fúzovat a vytvořit heterokaryon (dvoujaderná buňka);
- při mitóze dochází k fúzi jader → synkaryon s oběma druhově typickými sadami chromozomů;
- potomstvo je nazýváno somatickými hybridy;
- frekvenci buněčných fúzí zvyšuje: polyetylenglykol, elektrické výboje o vysokém napětí;
- úspěšní zejména hybridi myší a lidských buněk (myš 20 akrocentrických chromozomů, výrazně se liší od lidských) → vybírány myší linie s deficitem určitého enzymu, jehož funkci u potomstva zcela přebírá odpovídající lidský gen → tyto hybridy mají tendenci k eliminaci lidských chromozomů;
- vzniká několik variant chromozomů, lidský chromozom nebo jeho část vysledovatelný pomocí metod pruhování → možno sledovat lidské produkty;
- podařilo se lokalizovat genový komplex HLA systému člověka dle jeho antigenních produktů a translokace do distální části p-raménka chromozomu 6.
upravit Mapování pomocí hybridizace DNA
- Dvouvláknovou DNA lze reverzibilně denaturovat teplem → rozrušení vodíkových můstků mezi bázemi a oddělení obou řetězců;
- v modifikaci DNA-RNA použito vlákno mRNA, označené radioaktivním izotopem;
- báze označená izotopem se hybridizuje s částí DNA, kde je odpovědný strukturní gen;
- v modifikaci DNA-cDNA: použita cDNA sonda, syntezována in vitro dle vzoru mRNA pomocí reverzní transkriptázy;
- nově syntezované vlákno je kopií daného genu;
- pro diagnostické využití je třeba získanou cDNA (copy) namnožit a znovu označit izotopem;
- namnožení pomocí inkorporace cDNA do vhodného plazmidu, který je v bakteriích klonován;
- plazmidy s cDNA pak použity jako sondy pro hybridizace DNA-cDNA na chromozomech nebo restrikčních fragmentech DNA oddělených do plochy elektroforézou;
- metody jsou užívány k lokalizaci genů.
