Metody analýzy nukleových kyselin
Z WikiSkript
Hodnoceno 3x, počet editací 11, počet autorů 9
Děkujeme za Vaše hodnocení (2★)
Obsah |
upravit DNA
- revoluční technologie, vznikají rekombinantní molekuly DNA – základ pro studium
upravit Aplikace:
- analýza struktury genu, mapování, funkce
- analýza geneticky podmíněných onemocnění
- prenatální diagnostika
- detekce nosičů mutovaných alel
- diagnostika a patogeneze onemocnění
- biosyntéza – insulin, růstový hormon, ...
- léčba genetických onemocnění – genová terapie
- základní objev pro rozvoj
upravit Restrikční endonukleázy
Enzymy = tzv. restriktasy – z bakterií – schopnost štěpit dsDNA ve specifických místech daných určitou sekvencí nukleotidů
- většinou jde o palindromy
- restriktasy jsou třeba k získání dostatečného množství
- chrání bakterie před vniknutím cizorodé DNA
upravit Získání dostatečného množství DNA
- klonování – DNA kterou chceme namnožit vpravíme pomocí vektoru do prostředí → vektor a lidskou DNA rozštěpíme stejným způsobem → smísení obou molekul DNA → dimerická molekula
upravit Namnožení DNA – fragmentů
- PCR (polymerázová řetězová reakce) = mnohokrát opakovaná replikace DNA in vitro s tím, že každá replikovaná molekula DNA slouží jako templát:
- denaturovaná DNA → nasednutí primeru → syntéza DNA
- hybridizační techniky – k hledání daného fragmentu – potřebujeme tzv. sondu = tzv. Southern blotting, dsDNA, ssDNA; označená sonda →
→ rozštěpení enzymy na fragmenty → elektroforesa v agarovém gelu → přenos na nitrocelulosu → fixace DNA → kontakt se sondou (cDNA n RNA značená 32P) → fragmenty DNA, které hybridizovaly se sondou
- in situ hybridizace – sondy k určení polohy specifických nukleotidových sekvencí uvnitř buňky nebo na chromosomech; sondy značené fluorescenčními barvivy nebo radioaktivními izotopy
- RFLP (Restriction Fragment Lenth Polymorfism) – polymorfismus v délce restrikčních fragmentů → gelová elektroforesa → pozorování jednotlivých restrikčních fragmentů v UV-světle nebo po obarvení (ethidiumbromid)
upravit RNA
- Northern blotting - detekce specifické sekvence RNA
upravit Odkazy
upravit Zdroj
- ŠTEFÁNEK, Jiří. Medicína, nemoci, studium na 1. LF UK [online]. [cit. 11. 2. 2010]. <http://www.stefajir.cz>.
