Rekombinantní DNA

Z WikiSkript

Hodnoceno 5x, počet editací 15, počet autorů 9

Děkujeme za Vaše hodnocení (2★)

Přejít na: navigace, hledání

Uměle syntetizovaná DNA, která vzniká inzercí genu nebo určité části genu jednoho organismu do genomu jiného.
Rc-DNA molekuly obsahují úseky DNA rozdílných organismů.
Vytvářejí se insercí cizorodé DNA do vektoru (= bakteriální plazmid nebo fág).
- Fágy = bakteriální viry, které mohou infikovat bakterii, rozmnožovat se v ní a zapříčinit lýzu bakteriálních buněk – při tom se do prostředí uvolní potomstvo fága, které může infikovat okolí.

Plazmid E. coli (tzv. pBR322, měří 4362 bp) má více restrikčních míst, na kterých se dá kruh DNA otevřít specifickými restrikčními endonukleasami – to umožňuje, aby se úsek cizorodé DNA, rozštěpené tím stejným enzymem, včlenil do plazmidu = rekombinoval, a vytvořil tak rekombinovaný plazmid.
Rekombinované plazmidy se znovu vloží do bakterií, které se pak nechají namnožit, pod selekčním tlakem, tak je možné vytvořit klony bakterií, které nesou specificky restrikční fragment cizorodé DNA.

Příprava rekombinantní DNA začíná pokusem vložit množství víceméně náhodných restrikčních fragmentů do plazmidu, proto je zvlášť rozhodující rozpoznat konkrétní gen, což je možné tehdy, kdy je dostupná příslušná mRNA – ta se purifikuje a použije se na přípravu cDNA pomocí reverzní transkriptasy – výsledkem je radionuklidem značená molekula cDNA = tzv. sonda („probe“) – za osobitých podmínek se hybridizuje s genem, o který nám jde.

upravit Odkazy

ŠTEFÁNEK, Jiří. Medicína, nemoci, studium na 1. LF UK [online]. [cit. 2009]. <http://www.stefajir.cz>.

Článek neobsahuje vše, co by měl.
Můžete se přidat k jeho autorům a doplnit jej. O vhodných změnách se lze poradit v diskusi.