Vyšetření parametrů antioxidační kapacity

Přímé měření je obtížné vzhledem ke krátkému poločasu volných radikálů (VR). Stanovují se látky vzniklé jejich působením.

Obsah 1 Přímá stanovení 1.1 Stanovení kyslíkových radikálů 1.2 Stanovení radikálů dusíku a jeho aduktů 1.3 Stanovení látek generujících radikály 2 Nepřímá měření 2.1 Produkty poškození VR 2.1.1 Poškození NK 2.1.2 Poškození proteinů a AMK 2.1.3 Lipoperoxidace 2.1.4 Oxidované LDL 2.2 Antioxidační ochrana organismu 2.2.1 Celková antioxidační kapacita 2.2.2 Antioxidační enzymy 2.2.3 Antioxidační substráty 3 Odkazy 3.1 Související články 3.2 Externí odkazy 3.3 Použitá literatura

upravit Přímá stanovení

upravit Stanovení kyslíkových radikálů

• pulzní radiolýza – radikály jsou generovány ionizujícím zářením
• elektronová spinová rezonanční spektrometrie (ESR) – identifikace dle změn spinu
• chemiluminiscenční metoda

upravit Stanovení radikálů dusíku a jeho aduktů

• oxid dusnatý – jde velmi obtížně stanovit
• metody jako u kyslíku
• nejčastěji však nepřímé metody – nitrity, nitráty nebo látky modifikované nitrací – nitrosohemoglobin

upravit Stanovení látek generujících radikály

• xanthinoxidasa – produkuje superoxid
• stanovení přechodných kovů – Fe, Cu (katalyzují reakce, kde vznikají volné radikály)

upravit Nepřímá měření

• nejčastěji stanovení produktů lipoperoxidace, aduktů s DNA

upravit Produkty poškození VR

upravit Poškození NK

• nejvýznamnější (ireverzibilní) poškození – hydroxylovým radikálem
• hlavní produkt – thyminglykol a 8-hydroxyguanin
• reparační enzymy je odstraňují z buněk – můžeme je stanovit v moči

upravit Poškození proteinů a AMK

• mnoho mechanismů poškození, málo využíváno
• senzitivní metoda je na měření karbonylových zbytků z lysinu

upravit Lipoperoxidace

• v přímé souvislosti s tvorbou volných radikálů
• nejčastější – stanovení malondialdehydu (MDA) – reakce s thiobarbiturátem tvoří barevný komplex, nespecifické, reaguje též např. bilirubin, DNA
• i další aldehydy (např. 4-hydroxynonenal)
• konjugované dieny – charakteristická UV absorpce (234 nm)
• měření uhlovodíků ve vydechovaném vzduchu
• isoprostany – peroxidací produktů kyseliny arachidonové

upravit Oxidované LDL

• podíl na ateroskleróze
• 2 metody

1. změna fáze prodlevy při stimulované peroxidaci – vyšetří schopnost LDL vyrovnat se s oxidačním stresem
2. stanovení oxLDL – extrakce, zjišťuje se oxFFA při 234 nm

upravit Antioxidační ochrana organismu

upravit Celková antioxidační kapacita

• artificiální tvorba volných radikálů v biologickém materiálu – měříme schopnost tuto reakci zbrzdit či zastavit
• TRAP stanovení – schopnost plasmy po přidání generátoru – přepočet na kapacitu Troloxu – 1 molekula troloxu má 2,0 jednotek při užití TRAP – nevýhoda – end-point kyslíková elektroda
• více užívaná ABTS – inhibice radikálového kationtu ABTS

upravit Antioxidační enzymy

• stanovení SOD spíše napřímo, stanovení katalasy – málokdy

upravit Antioxidační substráty

• vitaminy A, E, C
• stanovení thiolů nemá význam (jsou na albuminu, mají dlouhý poločas)
• také i jiné – ubichinon Q, lipoát, flavonoidy…, pomocí vysokoúčinné (vysokotlaké) kapalinové chromatografie (HPLC)

upravit Odkazy

upravit Související články

• Základní reaktivní formy kyslíku a dusíku

upravit Externí odkazy

• Tartrate-resistant acid phosphatase

upravit Použitá literatura

• SCHNEIDERKA, Petr, et al. Kapitoly z klinické biochemie. 2. vydání. Praha : Karolinum, 2004. ISBN 80-246-0678-X.