Vyšetření parametrů antioxidační kapacity

Přímé měření je obtížné vzhledem ke krátkému poločasu volných radikálů (VR). Stanovují se látky vzniklé jejich působením.

Přímá stanovení

Stanovení kyslíkových radikálů

• pulzní radiolýza – radikály jsou generovány ionizujícím zářením
• elektronová spinová rezonanční spektrometrie (ESR) – identifikace dle změn spinu
• chemiluminiscenční metoda

Stanovení radikálů dusíku a jeho aduktů

• oxid dusnatý – jde velmi obtížně stanovit
• metody jako u kyslíku
• nejčastěji však nepřímé metody – nitrity, nitráty nebo látky modifikované nitrací – nitrosohemoglobin

Stanovení látek generujících radikály

• xanthinoxidáza – produkuje superoxid
• stanovení přechodných kovů – Fe, Cu (katalyzují reakce, kde vznikají volné radikály)

Nepřímá měření

• nejčastěji stanovení produktů lipoperoxidace, aduktů s DNA

Produkty poškození VR

Poškození NK

• nejvýznamnější (ireverzibilní) poškození – hydroxylovým radikálem
• hlavní produkt – thyminglykol a 8-hydroxyguanin
• reparační enzymy je odstraňují z buněk – můžeme je stanovit v moči

8-hydroxyguanin

Thyminglykol

Poškození proteinů a AMK

• mnoho mechanismů poškození, málo využíváno
• senzitivní metoda je na měření karbonylových zbytků z lysinu

Lipoperoxidace

• v přímé souvislosti s tvorbou volných radikálů
• nejčastější – stanovení malondialdehydu (MDA) – reakce s thiobarbiturátem tvoří barevný komplex, nespecifické, reaguje též např. bilirubin, DNA
• i další aldehydy (např. 4-hydroxynonenal)
• konjugované dieny – charakteristická UV absorpce (234 nm)
• měření uhlovodíků ve vydechovaném vzduchu
• isoprostany – peroxidací produktů kyseliny arachidonové

Oxidované LDL

• podíl na ateroskleróze
• 2 metody

1. změna fáze prodlevy při stimulované peroxidaci – vyšetří schopnost LDL vyrovnat se s oxidačním stresem
2. stanovení oxLDL – extrakce, zjišťuje se oxFFA při 234 nm

Antioxidační ochrana organismu

Celková antioxidační kapacita

• artificiální tvorba volných radikálů v biologickém materiálu – měříme schopnost tuto reakci zbrzdit či zastavit
• TRAP stanovení – schopnost plasmy po přidání generátoru – přepočet na kapacitu Troloxu – 1 molekula troloxu má 2,0 jednotek při užití TRAP – nevýhoda – end-point kyslíková elektroda
• více užívaná ABTS – inhibice radikálového kationtu ABTS

Antioxidační enzymy

• stanovení SOD spíše nepřímo, stanovení katalázy – málokdy

Antioxidační substráty

• vitaminy A, E, C
• stanovení thiolů nemá význam (jsou na albuminu, mají dlouhý poločas)
• také i jiné – ubichinon Q, lipoát, flavonoidy…, pomocí vysokoúčinné (vysokotlaké) kapalinové chromatografie (HPLC)

Odkazy

Související články

• Základní reaktivní formy kyslíku a dusíku

Externí odkazy

• Tartrate-resistant acid phosphatase

Použitá literatura

• SCHNEIDERKA, Petr, et al. Kapitoly z klinické biochemie. 2. vydání. Praha : Karolinum, 2004. ISBN 80-246-0678-X.