Vyšetření parametrů antioxidační kapacity

Z WikiSkript

Přímé měření je obtížné vzhledem ke krátkému poločasu volných radikálů (VR). Stanovují se látky vzniklé jejich působením.

Přímá stanovení[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

Stanovení kyslíkových radikálů[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  • pulzní radiolýza – radikály jsou generovány ionizujícím zářením
  • elektronová spinová rezonanční spektrometrie (ESR) – identifikace dle změn spinu
  • chemiluminiscenční metoda

Stanovení radikálů dusíku a jeho aduktů[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  • oxid dusnatý – jde velmi obtížně stanovit
  • metody jako u kyslíku
  • nejčastěji však nepřímé metody – nitrity, nitráty nebo látky modifikované nitrací – nitrosohemoglobin

Stanovení látek generujících radikály[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  • xanthinoxidáza – produkuje superoxid
  • stanovení přechodných kovů – Fe, Cu (katalyzují reakce, kde vznikají volné radikály)

Nepřímá měření[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  • nejčastěji stanovení produktů lipoperoxidace, aduktů s DNA

Produkty poškození VR[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

Poškození NK[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  • nejvýznamnější (ireverzibilní) poškození – hydroxylovým radikálem
  • hlavní produkt – thyminglykol a 8-hydroxyguanin
  • reparační enzymy je odstraňují z buněk – můžeme je stanovit v moči
8-hydroxyguanin
Thyminglykol

Poškození proteinů a AMK[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  • mnoho mechanismů poškození, málo využíváno
  • senzitivní metoda je na měření karbonylových zbytků z lysinu

Lipoperoxidace[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  • v přímé souvislosti s tvorbou volných radikálů
  • nejčastější – stanovení malondialdehydu (MDA) – reakce s thiobarbiturátem tvoří barevný komplex, nespecifické, reaguje též např. bilirubin, DNA
  • i další aldehydy (např. 4-hydroxynonenal)
  • konjugované dieny – charakteristická UV absorpce (234 nm)
  • měření uhlovodíků ve vydechovaném vzduchu
  • isoprostany – peroxidací produktů kyseliny arachidonové

Oxidované LDL[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  1. změna fáze prodlevy při stimulované peroxidaci – vyšetří schopnost LDL vyrovnat se s oxidačním stresem
  2. stanovení oxLDL – extrakce, zjišťuje se oxFFA při 234 nm

Antioxidační ochrana organismu[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

Celková antioxidační kapacita[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  • artificiální tvorba volných radikálů v biologickém materiálu – měříme schopnost tuto reakci zbrzdit či zastavit
  • TRAP stanovení – schopnost plasmy po přidání generátoru – přepočet na kapacitu Troloxu – 1 molekula troloxu má 2,0 jednotek při užití TRAP – nevýhoda – end-point kyslíková elektroda
  • více užívaná ABTS – inhibice radikálového kationtu ABTS

Antioxidační enzymy[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  • stanovení SOD spíše nepřímo, stanovení katalázy – málokdy

Antioxidační substráty[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  • vitaminy A, E, C
  • stanovení thiolů nemá význam (jsou na albuminu, mají dlouhý poločas)
  • také i jiné – ubichinon Q, lipoát, flavonoidy…, pomocí vysokoúčinné (vysokotlaké) kapalinové chromatografie (HPLC)

Odkazy[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

Související články[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

Externí odkazy[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

Použitá literatura[✎ upravit | ☲ editovat zdroj]

  • SCHNEIDERKA, Petr, et al. Kapitoly z klinické biochemie. 2. vydání. Praha : Karolinum, 2004. ISBN 80-246-0678-X.